Biotecnología

Actividad Biológica

IPNA-CSIC se complace en ofrecer su servicio de actividad biológica para dar soporte a empresas farmacéuticas, cosméticas o agroalimentarias así como a centros de investigación o universidades para analizar productos naturales, extractos, compuestos químicos y biotecnológicos. La situación del laboratorio dentro del Instituto de Productos Naturales y Agrobiología (IPNA-CSIC) nos permite colaborar con los diversos departamentos del centro, además de la Universidad de La Laguna (ULL) y otros centros con convenio.  Contamos con una política de calidad basada en el cumplimiento de las Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL) y la implantación de la norma UNE-EN ISO/IEC 17025 sobre la competencia técnica de los laboratorios de ensayo. Y un personal cualificado y familiarizado con el uso de las tecnologías de los ensayos y con el análisis e interpretación de los resultados. Queremos dar servicio para las áreas de síntesis de compuestos, extracción de productos naturales, evaluación farmacológica, actividad de productos cosméticos, potencial terapéutico de nuevas moléculas, evaluación de propiedades agroalimentarias, etc.

 

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Laboratorio

Tipo de análisis

Análisis de actividad antimicrobiana in vitro

Screening de compuestos activos antimicrobianos: La prueba de screening antimicrobiano consiste en testar cada una de las muestras disueltas a una concentración determinada frente a una batería de microorganismos (tanto bacterias como hongos recomendados por EUCAST) y  comprobar si tiene alguna actividad antimicrobiana comparándolo con controles antibióticos y antifúngicos. Se trata de una prueba en halo, si el compuesto tiene actividad antimicrobiana presentará un halo de inhibición de crecimiento del microorganismo en la placa. Si por el contrario no tiene actividad, no presentará halo y se verá de la misma manera que el control negativo de nuestro ensayo. Es un análisis cualitativo.Las bacterias utilizadas para este análisis son: Eschericchia coli, Staphilococcus aureus, Enteroccocus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter jejuni, Haemophilus infuenzae y Streptococcus pneumoniae. Los hongos utilizados son: Candida albicans y Aspergillus pulverulentus.

Concentración mínima inhibitoria (MIC): La concentración mínima inhibitoria (MIC) es la concentración más baja de un compuesto antimicrobiano que inhibe el crecimiento de un determinado microorganismo. Es importante para determinar la actividad de los posibles nuevos agentes antimicrobianos. Se trata de un ensayo cuantitativo, se mide la absorbancia a 595 nm y se determina el pocillo donde el crecimiento celular queda inhibido. Se realiza en una placa de 96 pocillos donde se ensayan 10 concentraciones diferentes de cada compuesto. Las bacterias utilizadas para este análisis son: Eschericchia coli, Staphilococcus aureus, Enteroccocus faecalis, Pseudomonas aeruginosa y Campylobacter jejuni.  

 

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MIC

A continuación mostramos un ejemplo de los resultados que se obtienen: Imagen 1: fotografía de los resultados del MIC tras 24h. Se observa la inhibición del crecimiento en los pocillos marcados y los controles positivos y negativos.

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results

Imagen 2: Resultados medición absorbancia a 595 nm tras 24h de crecimiento.

MIC + cinética de crecimiento celular: Se realiza el ensayo para la determinación de la concentración mínima inhibitoria (MIC) de forma monitorizada en el tiempo. Se obtienen los mismos resultados que en el MIC y además, mediante un gráfico se puede visualizar el crecimiento celular frente al tiempo y poder cuantificar la actividad antimicrobiana contra diversos microorganismos.

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Actividad biológica cinetica

Imagen: Figura: Se muestran los resultados de un análisis de dos compuestos (densidad óptica/tiempo): #18 sin actividad antimicrobiana y #9 con actividad antimicrobiana frente al microorganismo testado.

Preservación antimicrobiana de productos cosméticos

Se realiza el test para probar la seguridad microbiológica de los productos cosméticos antes de que puedan salir al mercado. Se basa en una inoculación de microorganismos de colección oficial y su posterior medición para evaluar el aumento del número de colonias en el producto a testar. Los microorganismos utilizados son: Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida albicans y Aspergillus niger. Es posible aumentar el número de microorganismos para el ensayo.

Análisis de comunidad microbiana

Este ensayo consiste en evaluar el comportamiento de una comunidad microbiana frente a 31 fuentes de carbono distintas, lo cual nos aporta información sobre la huella metabólica de una determinada comunidad. Este análisis tiene diversas aplicaciones en el campo de la ecología microbiana como por ejemplo la detección de los cambios poblacionales en los suelos.

Análisis de actividad hemolítica

En este ensayo se mide la capacidad hemolítica in vitro de cada compuesto a diversas concentraciones. Se trata de un análisis cuantitativo donde se evalúa la hemoglobina libre presente tras la incubación de eritrocitos sanos con el compuesto a testar.

Análisis Brettanomyces en bodegas

Identificación y recuento en placa: Ponemos a la disposición de clientes del sector vinícola o cervecero el servicio de identificación y recuento de la levadura Brettanomyces en muestras como vino, mosto, cerveza o agua de lavado. En este análisis se realiza un cultivo de la muestra en medio específico para Brettanomyces con el cual podemos identificar la presencia de dicho microorganismo y obtener un número de células representativo de la muestra.

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brettanomyces

Identificación mediante PCR: La identificación mediante PCR nos posibilita detectar el ADN de Brettanomyces incluso cuando el microorganismo no se presente vivo. Es un análisis rápido y eficaz que nos permite encontrar ADN de la levadura amplificando su secuencia dentro de la muestra. Además de la identificación mediante PCR se podría añadir el servicio de secuenciación de la muestra para averiguar la cepa exacta de Brettanomyces encontrada.

Análisis capacidad antioxidante

Método ORAC: Ensayo cuantitativo que determina la capacidad de absorción de radicales de oxígeno (ORAC) utilizando fluorescencia. Mide la inhibición antioxidante de las oxidaciones inducidas por los radicales de peroxilo, es una medida de la capacidad antioxidante total.

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metodo orac

Figura procedente del artículo: Brescia, P. J. Determination of Antioxidant potential using an Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) Assay with Synergy TM H4. BioTek Appl. Note 4–12 (2012).

Próximos ensayos de actividad biológica
  • Antioxidante DPPH
  • Actividad antibiofilm
  • Actividad quelante de metales pesados

Equipamiento

Contamos con un equipamiento formado por:

  • Lector de microplacas de 96 pocillos OMEGA, agitador/incubador bacteriológico detecctor de intensidad de de fluorescencia, luminiscencia, absorbancia UV/Vis y fluorescencia en tiempo resuelto.
  • Cabina de flujo laminar de tipo 2 de dos metros de ancho.
  • Termo agitador de placas.
  • Incubador de microorganismos.
  • Autoclave de 150 L de capacidad.
  • Frigorífico y congelador no frost para el almacenamiento de reactivos.
  • Ultracongelador de -80ºC para el almacenamiento de las muestras biológicas y para mantener el cepario de microorganismos.
  • Reservorio de cepas recomendadas por el Comité Europeo de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana – EUCAST para controles de calidad.

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